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| 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠磷酸化β-连环蛋白（P-β-catenin）水平。用纯化的大鼠磷酸化β-连环蛋白（P-β-catenin）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入磷酸化β-连环蛋白（P-β-catenin），再与HRP 标记的磷酸化β-连环蛋白（P-β-catenin）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的磷酸化β-连环蛋白（P-β-catenin）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠磷酸化β-连环蛋白（P-β-catenin）浓度。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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1.准备试剂，样品和标准品 2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟 3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟 4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟 5.加入终止液 6.15分钟之内读OD值 7.计算 |
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1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 5. 培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 6. 组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 7. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 |
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