|
| 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人短腭肺鼻腔上皮癌关联蛋白1（splunc1）水平。用纯化的人短腭肺鼻腔上皮癌关联蛋白1（splunc1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入短腭肺鼻腔上皮癌关联蛋白1（splunc1），再与HRP 标记的短腭肺鼻腔上皮癌关联蛋白1（splunc1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的短腭肺鼻腔上皮癌关联蛋白1（splunc1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人短腭肺鼻腔上皮癌关联蛋白1（splunc1）浓度。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
1.准备试剂，样品和标准品 2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟 3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟 4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟 5.加入终止液 6.15分钟之内读OD值 7.计算 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 5. 培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 6. 组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 7. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
